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GO、KEGG富集分析(一)有参情况

对基因的描述一般从三个层面进行:

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这三个层面具体是指:

得到GO注释

做GO分析的思路:

比如,在疾病研究的时候,进行药物治疗之后某些基因的表达量明显的发生了变化,拿这些基因去做GO分析发现在Biological process过程当中集中在RNA修饰上,然后在此基础上继续进行挖掘。这个例子就是想启示大家拿到差异表达基因DEG只是一个开始,接下来就应该去做GO注释,之后需要进行一个分析看这些注释主要集中在哪个地方。假如我们有100个差异表达基因其中有99个都集中在细胞核里,那我们通过GO分析就得到了一个显著的分布。

GO富集分析原理:

有一个term注释了100个差异表达基因参与了哪个过程,注释完之后(模式生物都有现成的注释包,不用我们自己注释),计算相对于背景它是否显著集中在某条通路、某一个细胞学定位、某一种生物学功能。

clusterProfiler是一个功能强大的R包,同时支持GO和KEGG的富集分析,而且可视化功能非常的优秀,本章主要介绍利用这个R包来进行Gene Ontology的富集分析。

进行GO分析时,需要考虑的一个基础因素就是基因的GO注释信息从何处获取。Bioconductor上提供了以下19个物种的Org类型的包,包含了这些物种的GO注释信息

对于以上19个物种,只需要安装对应的org包,clusterProfile就会自动从中获取GO注释信息,我们只需要差异基因的列表就可以了,使用起来非常方便。

1.1 准备输入数据

待分析的数据就是一串基因名称了,可以是ensembl id、entrze id或者symbol id等类型都可以。把基因名称以一列的形式排开,放在一个文本文件中(例如命名“gene.txt”)。Excel中查看,就是如下示例这种样式。

1.3 GO富集分析

加载了注释库之后,读取基因列表文件,并使用clusterProfiler的内部函数enrichGO()即可完成GO富集分析。

读取基因列表文件,并使用clusterProfiler的内部函数enrichKEGG()即可完成KEGG富集分析。

此外,clusterProfiler中也额外提供了一系列的可视化方案用于展示本次富集分析结果,具有极大的便利。

参考:

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【R语言】解决GO富集分析绘图,标签重叠问题

前面我给大家详细介绍过

☞GO简介及GO富集结果解读

☞四种GO富集柱形图、气泡图解读

☞GO富集分析四种风格展示结果—柱形图,气泡图

☞KEGG富集分析—柱形图,气泡图,通路图

☞ DAVID GO和KEGG富集分析及结果可视化

也用视频给大家介绍过

☞ GO和KEGG富集分析视频讲解

最近有粉丝反映说,利用clusterProfiler这个包绘制GO富集分析气泡图和柱形图的时候,发现GO条目的名字都重叠在一起了。

气泡图

柱形图

这个图别说美观了,简直不忍直视。经过我的认真研究,发现跟R版本有关。前面我给大家展示的基本都是R 3.6.3做出来的图。很多粉丝可能用的都是最新版本的R 4.1.2。

我们知道R的版本在不停的更新,相应的R包也在不停的更新。我把绘制气泡图和柱形图相关的函数拿出来认真的研究了一下,终于发现的症结所在。

dotplot这个函数,多了个 label_format 参数

我们来看看这个参数究竟是干什么用的,看看参数说明

label_format :

a numeric value sets wrap length, alternatively a custom function to format axis labels. by default wraps names longer that 30 characters

原来这个参数默认值是30,当标签的长度大于30个字符就会被折叠,用多行来展示。既然问题找到了,我们就来调节一下这个参数,把他设置成100,让我们的标签可以一行展示。

是不是还是原来的配方,还是熟悉的味道

同样的柱形图,我们也能让他恢复原来的容貌。

关于如何使用R做GO和KEGG富集分析,可参考下文

GO和KEGG富集分析视频讲解

R语言:clusterProfiler进行GO富集分析和Gene_ID转换

ID转换用到的是 bitr() 函数,bitr()的使用方法:

org.Hs.eg.db包含有多种gene_name的类型

keytypes() :keytypes(x),查看注释包中可以使用的类型

columns() :类似于keytypes(),针对org.Hs.eg.db两个函数返回值一致

select() :select(x, keys, columns, keytype, ...) eg.

函数enrichGO()进行GO富集分析,enrichGO()的使用方法:

举例:

如何使用R语言统计矩阵的一列中数值等于1的元素个数

上图是一个简单的例子,b为一矩阵,现在想统计第二列中数值等于1的元素个数,首先做一个逻辑判断,即b[,2]==1,得到一个由布尔变量true和false组成的向量。

此时只需要知道true的数量,由于对布尔变量求和,true转化为1,false转化为0,故对该向量求和即可得到true的数量,即b[,2]中等于1的数量。


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